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明膠酶譜法檢測(cè)試劑盒-2022動(dòng)態(tài)已更新《采購(gòu)/推薦》

發(fā)布時(shí)間: 2022-11-15  點(diǎn)擊次數(shù): 599次

明膠酶譜法檢測(cè)試劑盒-信帆生物《采購(gòu)/推薦》


本試劑盒采用酶譜法(Zymography)檢測(cè)MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測(cè)方法,其靈敏度可達(dá)1 nM,高于ELISA方法,其基本原理1和程序是:制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE 凝膠,含蛋白酶的樣品在此凝膠中進(jìn)行電泳,電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng)Buffer 孵育,凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶條帶的位置,蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮區(qū)域,從而能同時(shí)指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液,可檢測(cè)少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性,檢測(cè)靈敏度~1nM。試劑盒可進(jìn)行50次標(biāo)準(zhǔn)小膠檢測(cè)

 

染色步驟:
1. 此染色液即為工作液,使用時(shí)直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養(yǎng)皿中以考馬斯亮藍(lán)染色液覆蓋凝
膠,并緩慢搖動(dòng)2h;
2. 傾去染色液,用脫色液沖洗凝膠;
3. 以脫色液覆蓋凝膠,緩慢搖動(dòng)2h,傾去脫色液,再加入新脫色液進(jìn)行脫色,直至獲得清晰的藍(lán)色的條帶和干凈的背景(通常此過(guò)程需要2~4h,也可脫色過(guò)夜至清晰的藍(lán)色的條帶和干凈的背景);
4. 對(duì)凝膠進(jìn)行分析和照相,凝膠可放置在7%的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置(P2000)對(duì)
凝膠進(jìn)行處理后保存。
安全性:含有甲醇,無(wú)特殊毒性,按一般化學(xué)品操作規(guī)程處理。
說(shuō)明:
1. 染色液配方:0.25g 考馬斯亮藍(lán)R250+420ml 甲醇+100ml 冰乙酸,定容至1000ml,混合1h 后用
Whatman 1 號(hào)濾紙過(guò)濾,于室溫可無(wú)限期保存;
2. 脫色液配方:冰醋酸:甲醇:水=7:5:88(V:V:V);
3. 保存液:7%冰醋酸;
4. 凝膠染色之后,染色液可以回收利用,裝入新容器內(nèi),室溫或4 oC 保存,可反復(fù)使用2-4 次。



參考文獻(xiàn):
1.大腸桿菌及脂多糖對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)的影響
2.綠茶多酚EGCG增強(qiáng)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性及其相關(guān)機(jī)制研究
 
 

 

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